Hvilken metode er bedst?
— Tests for SARS-CoV-2 infektionsdiagnose
For bekræftede COVID-19 tilfælde, rapporterede de almindelige kliniske symptomer inkluderer feber, hoste, myalgi eller træthed.Alligevel er disse symptomer ikke unikke træk ved COVID-19, fordi disse symptomer ligner symptomerne ved andre virusinficerede sygdomme såsom influenza.I øjeblikket er virusnukleinsyre Real-Time PCR (rt-PCR), CT-billeddannelse og nogle hæmatologiske parametre de primære værktøjer til klinisk diagnose af infektionen.Mange laboratorietestsæt er blevet udviklet og brugt til at teste patientprøver for COVID-19 af det kinesiske CDC1, US CDC2og andre private virksomheder.IgG/IgM antistoftest, en serologisk testmetode, er også blevet tilføjet som et diagnostisk kriterium i Kinas opdaterede version af diagnose- og behandlingsvejledningen for den nye coronavirus-sygdom (COVID-19), som blev udgivet den 3. marts1.Virusnukleinsyre rt-PCR-testen er stadig den nuværende standard diagnostiske metode til diagnosticering af COVID-19.
StrongStep®Novel Coronavlrus (SARS-COV-2) Multiplex Real-Time PCR Kit (detektion for tre gener)
Alligevel lider disse realtids-PCR-testsæt, der leder efter viruss genetiske materiale, for eksempel i nasale, orale eller anale podninger, af mange begrænsninger:
1) Disse tests har lange ekspeditionstider og er komplicerede i drift;det tager generelt i gennemsnit over 2 til 3 timer at generere resultater.
2) PCR-testene kræver certificerede laboratorier, dyrt udstyr og uddannede teknikere til at betjene.
3) Der er nogle antal falske negativer for rt-PCR af COVID-19.Det kan skyldes lav SARS-CoV-2 viral belastning i den øvre luftvejs podningsprøve (Ny coronavirus inficerer hovedsageligt de nedre luftveje, såsom lungealveoler), og testen kan ikke identificere personer, der gik igennem en infektion, kom sig, og fjernet virussen fra deres kroppe.
Forskning af Lirong Zou et al4fandt, at højere viral belastning blev opdaget kort efter symptomdebut, med højere viral load detekteret i næsen end i halsen, og det virale nukleinsyreudskillelsesmønster hos patienter inficeret med SARS-CoV-2 ligner det hos patienter med influenza4og ser anderledes ud end det, der ses hos patienter inficeret med SARS-CoV-2.
Yang Pan et al5undersøgte serielle prøver (halspodninger, opspyt, urin og afføring) fra to patienter i Beijing og fandt ud af, at virusmængderne i halspodnings- og opspytprøver toppede omkring 5-6 dage efter symptomdebut. Spytprøver viste generelt højere virusmængder end svælgprøver.Der blev ikke påvist viralt RNA i urin- eller afføringsprøver fra disse to patienter.
PCR-test giver kun et positivt resultat, når virussen stadig er til stede.Testene kan ikke identificere personer, der gik igennem en infektion, kom sig og fjernede virussen fra deres kroppe.I praksis var kun omkring 30%-50% positive for PCR hos patienter med klinisk diagnosticeret ny coronavirus-lungebetændelse.Mange nye coronavirus-lungebetændelsespatienter kan ikke diagnosticeres på grund af negativ nukleinsyretest, så de kan ikke få den tilsvarende behandling i tide.Fra den første til den sjette udgave af retningslinjerne, udelukkende baseret på diagnosen af nukleinsyretestresultater, hvilket forårsagede store problemer for klinikere. Den tidligste "whistle-blower", Dr. Li Wenliang, en øjenlæge ved Wuhan Central Hospital, er død.I løbet af sin levetid fik han tre nukleinsyretests i tilfælde af feber og hoste, og sidste gang fik han PCR-positive resultater.
Efter diskussion af eksperter blev det besluttet at øge serumtestningsmetoder som et nyt diagnostisk kriterium.Mens antistoftest, også kaldet serologiske test, kan bekræfte, om nogen var inficeret, selv efter deres immunsystem har fjernet den virus, der forårsager COVID-19.
StrongStep® SARS-COV-2 IgG/IgM antistof hurtig test
IgG/IgM antistoftest vil hjælpe med at spore på en meget mere befolkningsbaseret måde, hvem der har haft infektionen, fordi mange tilfælde synes at være spredt fra asymptomatiske patienter, som ikke let kan identificeres.Et par i Singapore, manden testede positiv ved PCR, hans kones PCR-testresultat var negativt, men antistoftestresultaterne viste, at hun havde antistoffer, ligesom hendes mand.
Serologiske assays skal omhyggeligt valideres for at være sikker på, at de reagerer pålideligt, men kun på antistoffer mod den nye virus.En bekymring var, at ligheden mellem de vira, der forårsager alvorligt akut respiratorisk syndrom, og COVID-19 kunne føre til krydsreaktivitet.IgG-IgM udviklet af Xue Feng wang6blev anset for at kunne bruges som point-of-care test (POCT), da den kan udføres nær sengekanten med fingerstiksblod.Sættet har en sensitivitet på 88,66 % og specificitet på 90,63 %.Der var dog stadig falsk positive og falsk negative resultater.
I Kinas opdaterede version af diagnose- og behandlingsvejledningen for den nye coronavirus-sygdom (COVID-19)1, er bekræftede tilfælde defineret som mistænkte tilfælde, der opfylder et af følgende kriterier:
(1) Luftvejsprøver, blod- eller afføringsprøver testet positive for SARS-CoV-2-nukleinsyre ved hjælp af rt-PCR;
(2)Genetisk sekventering af virus fra luftvejs-, blod- eller afføringsprøver er meget homolog med den kendte SARS-CoV-2;
(3)Serumnyt coronavirus-specifikt IgM-antistof og IgG-antistof var positive;
(4)Serumnyt coronavirus-specifikt IgG-antistof ændret fra negativt til positivt eller coronavirus-specifikt IgG-antistof i løbet af genopretningsperioden er 4 gange højere end i den akutte periode.
Diagnose og behandling af COVID-19
| Retningslinier | Udgivet | Bekræftede diagnostiske kriterier |
| Version 7 | 3. marts 2020 | ❶ PCR ❷ NGS ❸ IgM+IgG |
| Version 6 | 18. februar 2020 | ❶ PCR ❷ NGS |
Reference
1. Retningslinjer for diagnosticering og behandling af ny coronavirus-lungebetændelse (prøveversion 7, National Health Commission of the People's Republic of China, udstedt den 3. marts 2020)
http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7652m/202003/a31191442e29474b98bfed5579d5af95.shtml
2. Forskningsbrug kun realtids RT-PCR-protokol til identifikation af 2019-nCoV
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html
3. Singapore hævder første brug af antistoftest til at spore coronavirus-infektioner
https://www.sciencemag.org/news/2020/02/singapore-claims-first-use-antibody-test-track-coronavirus-infections
4.SARS-CoV-2 viral belastning i prøver af øvre luftveje fra inficerede patienter 19. februar 2020 DOI: 10.1056/NEJMc2001737
5. Viralbelastninger af SARS-CoV-2 i kliniske prøver Lancet Infect Dis 2020 Udgivet online 24. februar 2020 (https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30113-4)
6. Udvikling og klinisk anvendelse af en hurtig IgM-IgG kombineret antistoftest for SARS-CoV-2
Infektionsdiagnose XueFeng Wang ORCID iD: 0000-0001-8854-275X
Indlægstid: 17-mars-2020
